Edición Genómica para el VIH

Uso de ratones infectados con VIH-1 para modificarlos mediante CRISPR/Cas9.

Administración intravenosa mediada por virus adenoasociado (AAV) de CRISPR / Cas9 dirigido a VIH-1 en animales transgénicos que albergan segmentos parciales de genoma de VIH-1 o ratones humanizados infectados con VIH-1, esto da como resultado la edición de copias integradas del genoma viral a partir de una amplia gama de tejidos. Mediante secuenciación de Sanger se confirmó la escisión esperada del genoma viral en estos ratones tratados.

De esta manera se espera que el próximo campo de estudio sea el organismo humano, como una posible cura para el VIH

Referencias Bibliográficas:
1. Eliminación del ADN del VIH por CRISPR de injertos de sangre del paciente en ratones humanizados. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6011019/
2. Unos científicos logran eliminar el VIH de animales vivos: otro posible paso hacia la cura del SIDA usando CRISPR

Terapia Génica con Stem Cells para el VIH

Un trasplante alogénico de células madre hematopoyéticas para 6 participantes (para tratamiento de linfoma) infectados con VIH , que sobrevivieron más de 2 años después del transplante alo-TCMH con células donantes de tipo salvaje CCR5. Factores como la fuente de células madre (5 médula ósea y 1 de cordón umbilical), el condicionamiento y un posible efecto de "reserva de injerto contra VIH" pueden haber contribuido. Comprender los mecanismos involucrados en la erradicación del VIH después de allo-HSCT puede permitir el diseño de nuevas estrategias curativas.

5 de los 6, tenían ADN proviral indetectable (<0,006 unidades infecciosas por millón de células). Uno presentó seronegatividad.

Referencias Bibliográficas:

Salgado M, Kwon M, Gálvez C, Badiola J, Nijhuis, M. Bandera, A. (2018). Mecanismos que contribuyen a una reducción profunda del reservorio de VIH-1 después del trasplante alogénico de células madre. Anales de Medicina Interna.  Disponible en: http://annals.org/aim/article-abstract/2707334/mechanisms-contribute-profound-reduction-hiv-1-reservoir-after-allogeneic-stem Doi: 10.7326 / m18-0759

Transgénico para el VIH

En agosto de este año se publicó un artículo sobre el desarrollo de una línea de arroz transgénico que expresa tres proteínas microbicidas (el anticuerpo 2G12 neutralizante del VIH y las lectinas GRFT y CV-N). La expresión simultánea en la misma planta permite que el extracto de semilla cruda se use directamente como un cóctel microbicida tópico, evitando los costos de múltiples procesos posteriores. Es una innovadora estrategia para la fabricación de microbicidas a un costo lo suficientemente bajo para el mundo en desarrollo, donde la profilaxis del VIH es más demandada.

VENTAJAS Y DESVENTAJAS DEL USO DE TRANSGÉNICOS

Referencias Bibliográficas:

1. Vamvaka, E., Farré, G., Molinos-Albert, LM, Evans, A., Canela-Xandri, A., Twyman, RM, ... Capell, T. (2018). Inesperada sinergística neutralización del VIH por un triple microbicida producido en el endospermo de arroz. Actas de la Academia Nacional de Ciencias, 115 (33), E7854 – E7862. doi: 10.1073 / pnas.1806022115 Disponible en: http://www.pnas.org/content/115/33/E7854
2. José Miguel Mulet. Transgénicos ¿Héroes o Villanos? Disponible en: https://youtu.be/w7rx48Lm8YU

DNA Recombinante

En la naturaleza

El DNA recombinante natural se encuentra en procesos como la: reproducción sexual, transformación bacteriana, infección viral. El virus del HIV es un ejemplo perfecto para este tipo de recombinación, ya que este durante la infección, combina el DNA proviral con el DNA del huésped, cuando ha ingresado al núcleo.

Artificial

Existen métodos utilizados para diagnosticar VIH que han sido desarrollados utilizando ADN recombinante. Este test utiliza una proteína de VIH recombinante para encontrar la presencia de anticuerpos que el cuerpo ha producido en respuesta a la infección.

Referencias Bibliográficas:
1. Chin CR, Perreira JM, Savidis G, et al. La visualización directa de los intermedios de replicación del VIH-1 muestra que Capsid y CPSF6 modulan la integración e invasión intra-nuclear del VIH-1. Rep . Celular 2015; 13 (8): 1717-31. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC5026322/ 
2. Álvarez Iván. Interpretación de las pruebas usadas para diagnosticar la infección por virus de la inmunodeficiencia humana. Acta Med Peru. 2017;34(4):309-16 Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/amp/v34n4/a09v34n4.pdf

Western Blot

Es una prueba altamente específica, se realiza con muestra de sangre del paciente que ha sido sometido a una prueba de tamizaje positiva, se realiza una prueba confirmatoria como lo es Western Blot.  La prueba se considera positiva cuando aparecen las proteínas p24, p41 (gp160 o gp120) o tat. El resultado positivo confirma definitivamente la infección por el VIH; el negativo la descarta, excepto cuando existe evidencia de exposición reciente y reiterada a esta infección. Debido a su alto costo se la usa en caso de que una prueba de inmunofluorescencia indirecta haya dado un resultado indeterminado.

Referencias Bibliográficas

1.  Rayne F , Debaisieux S , Tu A, Chopard C, Tryoen-Toth P , Beaumelle B. Detección de Tat del VIH -1 en sobrenadantes de cultivos celulares por ELISA o Western Blot Métodos Mol Biol. 2016; 1354: 329-42. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/26714722
2. Kondo M, Sudo K, Sano T, et al. Evaluación comparativa del ensayo confirmatorio de VIH 1/2 de Geenius y las transferencias Western de VIH-1 y VIH-2 en la población japonesa. PLoS Uno. 2018; 13 (10): e0198924.Publicado en 2018 el 31 de octubre. Disponible en: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC6209130/
3. Álvarez Iván. Interpretación de las pruebas usadas para diagnosticar la infección por virus de la inmunodeficiencia humana. Acta Med Peru. 2017;34(4):309-16 Disponible en: http://www.scielo.org.pe/pdf/amp/v34n4/a09v34n4.pdf

PCR para VIH

T:  Ensayo cualitativo de PCR en tiempo real para VIH-1 y VIH-2 ARN

O: Desarrollar un análisis mediante PCR en tiempo real cualitativo para detectar el ARN del VIH- 1 y el ARN del VIH- 2 que se puede realizar en paralelo, debido a que el uso del Western Blot ocasiona reacciones cruzadas entre el virus de inmunodeficiencia humana 1 y 2, causando dificultad de distinguir entre un estado de coinfección y un resultado falso positivo.

M: Sangre (plasma)

AN: ARN viral (VIH1 cepa 8E5 y VIH-2 Cepa ROD)

GEN: Gag (p24)

EX: Se realiza la purificación con QIAamp® MinElute® Virus Spin que se utiliza a partir de una muestra de plasma o sueros libres de células.

PCR: Real Time PCR (50 ciclos)

  D: 94ºC por 1 segundo

  H: 60ºC por 10 segundos

  E: 72ºC por 10 segundos

V: Electroforesis en gel de Agarosa

Gen: Gag (p24)

Sensibilidad: No específica

Especificidad: 95%

Artículo usado: 

Yamazaki, S., Kondo, M., Sudo, K., Ueda, T., Fujiwara, H., Hasegawa, N., y Kato, S. (2016). Ensayo cualitativo de PCR en tiempo real para el VIH-1 y el ARN del VIH-2. Revista japonesa de enfermedades infecciosas, 69 (5), 367-372. Disponible en: http://sci-hub.tw/10.7883/yoken.JJID.2015.309  

Pruebas de tamizaje y confirmatorias

PRUEBAS DE TAMIZAJE

Detecta la presencia de antígenos y anticuerpos frente al VIH, primer paso para el diagnóstico de la infección.

Pruebas rápidas: Pruebas que pueden utilizar sangre, detectan anticuerpos al VIH, no requieren equipos especiales, fáciles y su resultado es casi inmediato. 

Prueba Elisa: Prueba de laboratorio que indica la presencia de anticuerpos al VIH en la sangre de la persona, requiere equipos especiales.

PRUEBAS CONFIRMATORIAS

Cuando una prueba de tamizaje ha dado “reactiva”, se requiere confirmar el virus mediante pruebas directas:

Western Blot: Detecta la presencia de anticuerpos específicos contra el VIH. Posee un 94,9% de sensibilidad frente al antígeno viral de VIH 1 y un 100% de especificidad.

PCR Cuantitativo: Se utiliza como confirmatoria en niños y niñas menores de 18 meses puesto que las pruebas antes descritas detectan anticuerpos (de la madre) y causan respuestas “falsas positivas” en estos niños y niñas.

Tomada de: StopVIH.com

Referencia Bibliográfica:

1. Hurt Christopher; Nelson Julie AE; Hightow-Weidman Lisa B.; Miller William C. Selección de una prueba de VIH: una revisión narrativa para clínicos e investigadores. Enf trans sex. 44 (12): 739–746, DIC 2017. Disponible en: https://insights.ovid.com/pubmed?pmid=29140890

2. Guía Nacional de Consejería en VIH/sida 2011 del Ministerio de Salud Pública del Ecuador. http://www.coalicionecuatoriana.org/web/pdfs/Guia-nacional-consejeria-en-VIH-sida-MSP-2011.pdf